一种检测食品中大肠杆菌的酶联免疫方法，属于免疫分析领域。本发明应用大肠杆菌E.coliO146(ATCC8739)，购自中国医学微生物菌种保藏管理中心，菌体免疫8周龄的BALB/c小鼠，经过正常的免疫、细胞融合、筛选后得到5株大肠杆菌E.coli单克隆抗体。5株单抗分别标记辣根过氧化物酶（HRP）并进行两两配对。分别以1号单抗CGMCC No.7202为包被抗体、2号单抗CGMCC No.7203为酶标抗体，以大肠杆菌E.coli为标准品建立了大肠杆菌E.coli的夹心ELISA分析方法，LOD为4.8×10⁵cfu/mL，R²=0.99。本发明采用大肠杆菌E.coli作为免疫原，制备了理化性质高度均一、特异性好、可大量制备的大肠杆菌E.coli单克隆抗体，建立的夹心法为食品中E.coli菌的检测提供了快速、高效的分析手段。