本发明提供了一种家畜精液冷冻保护剂及其应用，所述冷冻保护剂包括A液和B液，A液包含葡萄糖、乙二胺四乙酸、二水柠檬酸钠、碳酸氢钠、氯化钾、青霉素、链霉素，B液包含果糖、三羟甲基氨基甲烷、柠檬酸、青霉素、链霉素、甘油、DMF、乙二醇、蛋黄。本发明是对现有常用的三种冷冻剂甘油、乙二醇、DMF进行优化组合，实现三种冷冻保护剂最佳的协同配伍效果。筛选出的能够提高家畜精液冷冻保存效果的冷冻保护剂组合，能有效延长家畜精子超低温冷冻保存存活效率以及有利于维持精子顶体完整性，可以在家畜养殖领域广泛推广应用，具有良好的市场效应和社会效应。